SSTR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403410-ACT

Somatostatinrezeptor 1 (SSTR1) ist ein an Gi/o gekoppelter G‑Protein‑gekoppelter Rezeptor, der Somatostatinpeptide bindet, um die Aktivität der Adenylatcyclase zu modulieren und intrazelluläres cAMP zu senken. Dadurch werden nachgeschaltete PKA‑Signalwege und transkriptionelle Antworten geprägt. Die Aktivierung von SSTR1 kann zudem die Leitfähigkeit von Ionenkanälen beeinflussen und kontextabhängig MAPK/ERK‑ sowie PI3K‑assoziierte Signalknoten einbinden, was Programme der zellulären Erregbarkeit, Sekretion und Proliferation beeinflusst. In menschlichen Geweben trägt SSTR1 zur neuroendokrinen Signalübertragung und zur regulatorischen Rückkopplung in Schaltkreisen des endokrinen und des Nervensystems bei. Eine dysregulierte Somatostatinrezeptor‑Signalgebung wurde im Zusammenhang mit veränderter Hormonausschüttung und rezeptorabhängiger Wachstumskontrolle in Modellen untersucht, die für die Biologie neuroendokriner und neurologischer Erkrankungen relevant sind.

SSTR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SSTR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SSTR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SSTR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SSTR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SSTR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SSTR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SSTR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SSTR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SSTR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.