Plásmido CRISPR de Activación (h) SRm300: sc-403447-ACT

SRRM2 codifica SRm300, una gran proteína nuclear rica en serina/arginina que actúa como andamiaje dentro del espliceosoma y regula las decisiones de empalme (splicing) del pre-ARNm. SRm300 se asocia con proteínas SR y otros factores de splicing en los speckles nucleares para coordinar la definición de exones, el splicing alternativo y el acoplamiento de la transcripción con el procesamiento del ARN. A través de estas actividades, SRRM2 contribuye a la diversidad de isoformas de transcritos y a la regulación del proteoma en vías que controlan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la diferenciación celular. Los programas de splicing desregulados y las dinámicas del espliceosoma asociadas a SRRM2 alteradas se han vinculado con fenotipos relevantes para la enfermedad en contextos de investigación en cáncer y neurodegeneración, donde el uso aberrante de isoformas puede influir en las salidas de señalización.

SRm300 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SRRM2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SRm300 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SRRM2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SRRM2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SRm300. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SRRM2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SRm300 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SRm300 en células tumorales con expresión de SRRM2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.