SRm300 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403447-ACT

SRRM2 codifica a SRm300, uma grande proteína nuclear rica em serina/arginina que atua como um arcabouço dentro do spliceossomo e regula decisões de splicing do pré-mRNA. A SRm300 associa-se a proteínas SR e a outros fatores de splicing em speckles nucleares para coordenar a definição de éxons, o splicing alternativo e o acoplamento da transcrição ao processamento de RNA. Por meio dessas atividades, SRRM2 contribui para a diversidade de isoformas de transcritos e para a regulação do proteoma em vias que governam a progressão do ciclo celular, respostas a dano no DNA e a diferenciação celular. Programas de splicing desregulados e dinâmicas spliceossomais alteradas associadas a SRRM2 têm sido relacionados a fenótipos relevantes para doenças em contextos de pesquisa em câncer e neurodegeneração, nos quais o uso aberrante de isoformas pode influenciar as saídas de sinalização.

SRm300 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SRRM2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SRm300 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SRRM2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SRRM2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SRm300. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SRRM2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SRm300 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SRm300 em células tumorais com expressão de SRRM2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.