Plásmido CRISPR de Activación (m) SREBP-2: sc-423153-ACT

El gen Srebf2 de ratón codifica la proteína 2 de unión al elemento regulador de esteroles (SREBP-2), un factor de transcripción anclado a la membrana que se activa por proteólisis en respuesta a una disminución de los niveles intracelulares de esteroles. La SREBP-2 activada se transloca al núcleo para inducir genes que regulan la biosíntesis y la captación de colesterol, incluidos componentes centrales de la vía del mevalonato y de la homeostasis del colesterol mediada por el receptor de LDL. Este eje regulador coordina la disponibilidad de lípidos con la biogénesis de membranas y la remodelación metabólica, y se interrelaciona con la señalización de estrés del retículo endoplásmico (RE) y con el control por retroalimentación de la detección de esteroles. La actividad desregulada de SREBP-2 se ha asociado con fenotipos de metabolismo lipídico alterado y contribuye a estudios mecanísticos de vías relevantes para enfermedades cardiometabólicas y hepáticas en modelos murinos.

SREBP-2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Srebf2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SREBP-2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Srebf2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Srebf2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SREBP-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Srebf2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SREBP-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SREBP-2 en células tumorales con expresión de Srebf2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.