Plásmido CRISPR de Activación (m) SREBP-1: sc-423152-ACT

El gen Srebf1 de ratón codifica SREBP-1, un factor de transcripción de tipo hélice-bucle-hélice básica con cremallera de leucina, anclado a la membrana, que se activa por proteólisis para controlar programas génicos anabólicos de lípidos. La SREBP-1 activa coordina la síntesis de novo de ácidos grasos y triglicéridos al inducir dianas como Acaca, Fasn, Scd1 y genes Elovl, integrando señales nutricionales y hormonales a través de la vía de señalización insulina–PI3K–AKT–mTORC1 y mediante interacción con las vías de LXR y PPAR. Al moldear la composición de fosfolípidos y la biogénesis de gotas lipídicas, SREBP-1 influye en la homeostasis del RE, la biosíntesis de membranas y la adaptación metabólica. La actividad desregulada de SREBF1/SREBP-1 se estudia con frecuencia en contextos que incluyen esteatosis hepática, resistencia a la insulina asociada a la obesidad, remodelación del tejido adiposo y programas de lipogénesis y proliferación en células tumorales.

SREBP-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Srebf1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SREBP-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Srebf1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Srebf1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SREBP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Srebf1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SREBP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SREBP-1 en células tumorales con expresión de Srebf1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.