Plasmide Double Nickase (h) SRA: sc-404308-NIC

SRA1 code pour le stéroïde receptor RNA activator 1 (SRA), un co-régulateur multifonctionnel sous forme d’ARN et de protéine, qui module des programmes transcriptionnels contrôlés par les récepteurs nucléaires et d’autres facteurs de transcription. SRA participe au remodelage de la chromatine et à l’assemblage de complexes transcriptionnels influençant l’expression de gènes sensibles aux hormones, en reliant la signalisation stéroïdienne à des processus régulateurs plus larges d’ordre épigénétique et médiés par l’ARN. Par ces activités, SRA1 est associé à des voies qui gouvernent la différenciation cellulaire, la régulation métabolique et des sorties transcriptionnelles liées à la réponse au stress. Une dérégulation de l’expression de SRA1/SRA a été rapportée dans divers contextes de maladies liées aux hormones et de pathologies prolifératives, ce qui étaye son intérêt comme cible mécanistique pour analyser les perturbations des réseaux transcriptionnels.

SRA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SRA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SRA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SRA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SRA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.