SR-1D Double Nickaseプラスミド (h): sc-404213-NIC

HTR1Dはヒトのセロトニン（5-ヒドロキシトリプタミン）受容体1D（SR-1D）をコードしており、これはGi/o共役型のGPCRです。SR-1Dはアデニル酸シクラーゼ活性を抑制して細胞内cAMPを低下させ、神経細胞の興奮性やシナプスでの神経伝達物質放出を調節します。SR-1Dシグナルはセロトニン作動性トーンの下流でMAPK/ERK経路やイオンチャネル制御にも影響し、中枢および末梢神経系におけるモノアミン伝達のシナプス前制御を形成します。この受容体は、神経血管調節や侵害受容処理を司る経路において研究されており、セロトニン作動性GPCRシグナルの変化は、片頭痛の生物学や関連する頭痛表現型などを含む神経疾患メカニズムと関連付けられています。HTR1Dの摂動はまた、GPCRの脱感作、β-アレスチン介在性トラフィッキング、ならびにセロトニン応答性ネットワークの回路レベルでの調節を検討するためにも用いられます。

SR-1D ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HTR1D 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HTR1D内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HTR1Dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HTR1Dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。