SPTLC1 Plasmide Double Nickase (m): sc-435265-NIC

Sptlc1 codifica la subunità 1 della base a catena lunga della serina palmitoiltransferasi (SPTLC1), un componente fondamentale del complesso serina palmitoiltransferasi che catalizza la prima fase, e quella limitante la velocità, della biosintesi de novo degli sfingolipidi. Controllando la produzione di basi sfingoidi e, a valle, di ceramidi e sfingomieline, SPTLC1 contribuisce a regolare la composizione delle membrane, la segnalazione lipidica e la funzione degli organelli, inclusa l’omeostasi del reticolo endoplasmatico (RE). Un’attività alterata di SPTLC1 può perturbare il flusso degli sfingolipidi, influenzando processi quali le risposte allo stress, la fisiologia mitocondriale e il mantenimento neuronale. La disregolazione di SPTLC1 è implicata in patologie associate a uno squilibrio degli sfingolipidi, a sostegno del suo impiego in studi meccanicistici sul metabolismo lipidico e sulla neurobiologia.

SPTLC1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sptlc1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sptlc1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sptlc1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sptlc1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.