Plasmide Double Nickase (m) SPTLC1: sc-435265-NIC

Sptlc1 code la sous-unité 1 de la sérine palmitoyltransférase à base longue chaîne (SPTLC1), un composant central du complexe sérine palmitoyltransférase qui catalyse la première étape, limitante, de la biosynthèse de novo des sphingolipides. En contrôlant la production des bases sphingoïdes ainsi que des céramides et sphingomyélines en aval, SPTLC1 contribue à réguler la composition membranaire, la signalisation lipidique et la fonction des organites, y compris l’homéostasie du réticulum endoplasmique (RE). Une activité altérée de SPTLC1 peut perturber le flux des sphingolipides, affectant des processus tels que les réponses au stress, la physiologie mitochondriale et le maintien des neurones. Le dérèglement de SPTLC1 est impliqué dans des troubles liés à un déséquilibre des sphingolipides, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du métabolisme lipidique et de la neurobiologie.

SPTLC1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sptlc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sptlc1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sptlc1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sptlc1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.