Plasmide CRISPR d'Activation (h) Spo11: sc-404432-ACT

Le gène humain **SPO11** code Spo11, une endonucléase de type topoisomérase spécifique de la méiose qui catalyse des cassures programmées de l’ADN double brin afin d’initier la recombinaison homologue. En créant des cassures au niveau des points chauds de recombinaison méiotique, Spo11 favorise la synapsis, la formation de crossing-over et la ségrégation correcte des chromosomes durant la gamétogenèse, ce qui le relie aux voies impliquées dans la réparation de l’ADN, la recombinaison et la stabilité du génome. Une perturbation ou une dérégulation de l’activité de **SPO11** peut altérer la progression de la méiose et les résultats de la recombinaison, ce qui en fait un élément pertinent pour l’étude de l’infertilité, de l’aneuploïdie et des mécanismes qui protègent l’intégrité chromosomique. **SPO11** est également utilisé comme facteur modèle pour analyser la formation contrôlée de cassures de l’ADN et le choix des voies de réparation dans des états cellulaires spécialisés.

Spo11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SPO11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Spo11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SPO11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SPO11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Spo11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SPO11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Spo11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Spo11 dans les cellules tumorales présentant une expression de SPO11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.