Particules Lentivirales d'Activation (h) SPNS2: sc-405481-LAC

SPNS2 (spinster homolog 2) code un transporteur membranaire multipasse qui exporte la sphingosine‑1‑phosphate (S1P), un médiateur lipidique bioactif qui façonne les gradients extracellulaires de S1P et la signalisation via les récepteurs S1PR. En contrôlant la disponibilité de la S1P, SPNS2 influence des processus tels que le trafic des cellules immunitaires, la biologie vasculaire et endothéliale, ainsi que la fonction de barrière, en interaction avec le métabolisme des sphingolipides et des voies dépendantes des GPCR comme les signalisations PI3K–AKT et MAPK. Une activité altérée de SPNS2 peut perturber l’homéostasie de la S1P et a été associée à des phénotypes inflammatoires et à des réponses immunitaires dérégulées dans des contextes pertinents pour la maladie. Par conséquent, SPNS2 est fréquemment étudiée afin d’analyser la régulation des transporteurs lipidiques et la communication dépendante de la S1P entre les tissus et les cellules immunitaires circulantes.

Les particules d'activation lentivirales SPNS2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SPNS2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SPNS2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SPNS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SPNS2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SPNS2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.