SPEN Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406083

Descripción general

SPEN (también conocido como SHARP) codifica un gran correagulador transcripcional nuclear de unión a ARN que acopla socios de unión al ADN específicos de secuencia y ARN largos no codificantes a complejos modificadores de la cromatina. Mediante interacciones con SMRT/HDAC y otros represores relacionados, SPEN contribuye a programas de silenciamiento transcripcional, incluida la inactivación del cromosoma X dependiente de XIST, e influye en la expresión génica específica de linaje. SPEN también modula las salidas transcripcionales sensibles a señales, con conexiones descritas con la regulación asociada a Notch y con un control epigenético más amplio de vías del desarrollo y relacionadas con el sistema inmunitario. La desregulación de la función o la expresión de SPEN se ha implicado en estados de diferenciación alterados y en la reprogramación transcripcional observada en múltiples contextos de enfermedad, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico en estudios de regulación génica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SPEN (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPEN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPEN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPEN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SPEN.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPEN para la investigación de la señalización de SPEN, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SPEN críticos para la función de SPEN
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPEN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SPEN CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SPEN CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPEN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SPEN (h) y el plásmido HDR SPEN (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPEN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPEN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.