SPEN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406083

Übersicht

SPEN (auch als SHARP bekannt) kodiert einen großen nukleären, RNA-bindenden transkriptionellen Koregulator, der sequenzspezifische DNA-bindende Partner und lange nichtkodierende RNAs mit chromatinmodifizierenden Komplexen koppelt. Über Interaktionen mit SMRT/HDAC und verwandten Repressoren trägt SPEN zu Programmen der transkriptionellen Stilllegung bei, einschließlich der XIST-abhängigen X-Chromosomen-Inaktivierung, und beeinflusst linienspezifische Genexpression. SPEN moduliert außerdem signalabhängige transkriptionelle Outputs; beschrieben sind Zusammenhänge mit Notch-assoziierter Regulation sowie einer breiteren epigenetischen Kontrolle entwicklungs- und immunrelevanter Signalwege. Eine Fehlregulation der SPEN-Funktion oder -Expression wurde mit veränderten Differenzierungszuständen und einer transkriptionellen Umprogrammierung in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was SPEN als mechanistischen Knotenpunkt für Studien zur Genregulation unterstützt.

Das SPEN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SPEN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SPEN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SPEN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPEN-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SPEN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPEN-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SPEN-Exone abzielen, die für die SPEN-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SPEN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPEN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPEN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SPEN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPEN HDR-Plasmid (h) und SPEN HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SPEN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SPEN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.