Plasmide Double Nickase (h) spectrin β II: sc-401818-NIC

SPTBN1 code la spectrine βII humaine, un composant central du cytosquelette spectrine–actine associé à la membrane, qui assure la stabilité de la membrane plasmique et organise l’architecture corticale. La spectrine βII contribue à la forme cellulaire, à la résistance mécanique et au trafic intracellulaire en servant d’échafaudage pour des canaux ioniques, des récepteurs et des complexes de signalisation au niveau de domaines membranaires spécialisés. Grâce à ses interactions avec les ankyrines et l’actine, elle participe à la coordination du remodelage du cytosquelette, du transport vésiculaire et de la polarité cellulaire au cours du développement et dans les tissus différenciés. Des altérations de la fonction de SPTBN1 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des dysfonctionnements du cytosquelette, ce qui en fait une cible utile pour étudier les mécanismes reliant l’échafaudage membranaire à la signalisation neuronale et à l’homéostasie cellulaire.

spectrin β II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SPTBN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SPTBN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SPTBN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SPTBN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.