Plasmide Double Nickase (m) SPARC: sc-423101-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SPARC correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SPARC Double Nickase (m) et le plasmide SPARC Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sparc. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SPARC Antibody (AON-1): sc-33645
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SPARC | sc-423101-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) SPARC | sc-423101-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sparc code pour SPARC (Secreted Protein Acidic and Rich in Cysteine), une glycoprotéine matricellulaire qui module l’assemblage de la matrice extracellulaire et les interactions cellule–matrice, plutôt que de servir de composant structural de la MEC. Dans les tissus de souris, SPARC influence la fibrillogenèse du collagène, la dynamique des adhésions focales et la biodisponibilité des facteurs de croissance, en s’intégrant à des voies qui régulent la migration cellulaire, la prolifération et le remodelage tissulaire. L’activité de SPARC est fréquemment liée à la réparation des plaies, à des contextes de signalisation angiogénique et à des programmes de remodelage fibrotique, via ses effets sur l’organisation du stroma et la rigidité de la matrice. Une expression altérée de SPARC a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des modifications du comportement du microenvironnement tumoral, au remodelage inflammatoire et à des phénotypes de fibrose d’organes, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les mécanismes pathologiques pilotés par la MEC.
SPARC Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sparc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sparc. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sparc. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sparc.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.