SPARC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423101

Descripción general

Mouse Sparc codifica SPARC (proteína secretada ácida y rica en cisteína), una glicoproteína matricelular que modula la organización de la matriz extracelular, el depósito de colágeno y las interacciones célula–matriz. SPARC influye en la señalización de integrinas, la dinámica de las adhesiones focales y la disponibilidad de factores de crecimiento, dando forma a procesos como la adhesión, la migración, la proliferación y la remodelación tisular. La alteración de la expresión de SPARC se asocia con fibrosis y una remodelación estromal aberrante, y se estudia con frecuencia en contextos de reparación de heridas, biología vascular y regulación del microambiente tumoral. En los sistemas inmunitario y musculoesquelético, las señales de la matriz dependientes de SPARC pueden afectar la inflamación, la osteogénesis y las propiedades mecánicas de los tejidos conectivos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SPARC (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sparc en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sparc junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sparc tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SPARC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sparc para la investigación de la señalización de SPARC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sparc críticos para la función de SPARC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sparc para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SPARC CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SPARC CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sparc. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SPARC (m) y el plásmido HDR SPARC (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sparc para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sparc definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.