SPAG5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403607-ACT

SPAG5 (spermienassoziiertes Antigen 5), auch als Astrin bekannt, kodiert ein mikrotubuliassoziiertes Protein, das sich an der mitotischen Spindel und an den Kinetochoren lokalisiert. Dort unterstützt es die Chromosomenausrichtung, die Integrität der Spindel sowie die zuverlässige Segregation der Schwesterchromatiden. SPAG5 ist an zentralen Prozessen der mitotischen Kontrolle beteiligt, darunter die Dynamik der Kinetochor–Mikrotubuli-Anheftung und die Regulation des Spindelkontrollpunkts, und ist damit mit dem Zellzyklusfortschritt und der Proliferationsfähigkeit verknüpft. Eine fehlregulierte SPAG5-Expression wird häufig in der Krebsbiologie untersucht, wo mitotischer Stress, chromosomale Instabilität und veränderte Proliferation ausgeprägte Merkmale sind. Daher wird SPAG5 in Studien zur Mitose, Genomstabilität und zu Signalwegen, die die Zellteilung steuern, широко als Forschungsziel eingesetzt.

SPAG5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SPAG5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SPAG5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SPAG5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SPAG5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SPAG5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SPAG5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SPAG5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SPAG5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SPAG5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.