SPAG17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410482

Übersicht

SPAG17 kodiert das spermienassoziierte Antigen 17, eine strukturelle und regulatorische Komponente des axonemalen Apparats, der die Funktion motiler Zilien und Flagellen unterstützt. Es ist an mikrotubulusbasierten Prozessen beteiligt und trägt zu den dyneinvermittelten Schlagmechaniken bei, die für eine effektive Zellbeweglichkeit und den Flüssigkeitstransport über Epithelien erforderlich sind. In der Humanbiologie wird eine veränderte Expression oder Störung von SPAG17 mit Defekten der Spermatogenese und der Spermienmotilität in Verbindung gebracht und ist zudem relevant für breitere, mit Ziliopathien assoziierte Phänotypen, die eine beeinträchtigte Zilienstruktur und -signalübertragung umfassen. Als zilien-/flagellenassoziiertes Protein ist SPAG17 außerdem nützlich, um zu untersuchen, wie die Organisation des Zytoskeletts mit der Zellzyklusdynamik und gewebespezifischen Differenzierungsprogrammen zusammenwirkt.

Das SPAG17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SPAG17-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SPAG17-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SPAG17 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPAG17-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SPAG17-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPAG17-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SPAG17-Exone abzielen, die für die SPAG17-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SPAG17-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPAG17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPAG17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SPAG17-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPAG17 HDR-Plasmid (h) und SPAG17 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SPAG17-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SPAG17-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.