SPACR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406681

Panoramica

IMPG1 codifica SPACR, un grande proteoglicano secreto che rappresenta un componente strutturale chiave della matrice interfotorecettoriale retinica e contribuisce all’adesione e al mantenimento della distanza tra i segmenti esterni dei fotorecettori e l’epitelio pigmentato retinico. Grazie a un’estesa glicosilazione e alle interazioni con altri costituenti della matrice extracellulare, SPACR sostiene l’organizzazione della matrice, la diffusione di molecole di segnalazione e il mantenimento dell’omeostasi dei fotorecettori. L’alterazione di IMPG1 è associata a patologie retiniche ereditarie, incluse distrofie maculari, evidenziandone la rilevanza per gli studi sull’integrità della matrice extracellulare e sui percorsi di sopravvivenza dei fotorecettori. In quanto proteina di matrice arricchita nella retina, SPACR è anche utilizzata per indagare come le matrici pericellulari modulino la comunicazione cellula–cellula e le risposte allo stress nel neuroepitelio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPACR (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IMPG1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IMPG1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IMPG1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPACR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IMPG1 per lo studio della segnalazione di SPACR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IMPG1 critici per la funzione di SPACR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IMPG1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPACR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPACR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IMPG1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPACR Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPACR (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IMPG1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IMPG1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.