SPACR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406681

Descripción general

IMPG1 codifica SPACR, un gran proteoglucano secretado que es un componente estructural clave de la matriz interfotoreceptora de la retina y contribuye a la adhesión y al espaciamiento entre los segmentos externos de los fotorreceptores y el epitelio pigmentario de la retina. Mediante una extensa glicosilación e interacciones con otros componentes de la matriz extracelular, SPACR favorece la organización de la matriz, la difusión de moléculas de señalización y el mantenimiento de la homeostasis de los fotorreceptores. La alteración de IMPG1 se asocia con trastornos retinianos hereditarios, incluidas distrofias maculares, lo que destaca su relevancia para estudios sobre la integridad de la matriz extracelular y las vías de supervivencia de los fotorreceptores. Como proteína de matriz enriquecida en la retina, SPACR también se utiliza para investigar cómo las matrices pericelulares modulan la comunicación célula–célula y las respuestas al estrés en el neuroepitelio.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SPACR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen IMPG1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del IMPG1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de IMPG1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SPACR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en IMPG1 para la investigación de la señalización de SPACR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de IMPG1 críticos para la función de SPACR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de IMPG1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SPACR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SPACR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus IMPG1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SPACR (h) y el plásmido HDR SPACR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología IMPG1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana IMPG1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.