SPACR Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406681

Visão geral

IMPG1 codifica a SPACR, um grande proteoglicano secretado que é um componente estrutural essencial da matriz interfotoreceptora da retina e contribui para a adesão e o espaçamento entre os segmentos externos dos fotorreceptores e o epitélio pigmentar da retina. Por meio de ampla glicosilação e de interações com outros constituintes da matriz extracelular, a SPACR sustenta a organização da matriz, a difusão de moléculas sinalizadoras e a manutenção da homeostase dos fotorreceptores. A disfunção de IMPG1 está associada a doenças hereditárias da retina, incluindo distrofias maculares, destacando sua relevância para estudos da integridade da matriz extracelular e de vias de sobrevivência dos fotorreceptores. Como proteína de matriz enriquecida na retina, a SPACR também é usada para investigar como matrizes pericelulares modulam a comunicação célula–célula e respostas ao estresse no neuroepitélio.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SPACR (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene IMPG1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do IMPG1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do IMPG1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SPACR.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de IMPG1 para a investigação da sinalização de SPACR, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) IMPG1 críticos para a função SPACR
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos IMPG1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SPACR Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SPACR Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus IMPG1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SPACR Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SPACR (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia IMPG1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo IMPG1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.