SPA-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406755

Übersicht

SIPA1 kodiert SPA-1, ein Rap1-GTPase-aktivierendes Protein, das die GTP-Hydrolyse beschleunigt, um die Rap1-Signalgebung zu begrenzen und integrinvermittelte Adhäsion, Zytoskelettdynamik und Zellmigration feinzujustieren. Durch die Modulation der Rap1-abhängigen Inside-out-Signalübertragung beeinflusst SPA-1 das Trafficking von Immunzellen, die Stabilität von Zell-Zell-Kontakten und die Reaktion auf extrazelluläre Signale. Eine veränderte Expression oder Aktivität von SIPA1 wurde mit fehlregulierten Programmen der Proliferation und Motilität in Verbindung gebracht, die für Tumorprogression und metastatisches Potenzial relevant sind. Diese Biologie macht SIPA1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von kleinen GTPase-Netzwerken, adhäsionsabhängiger Signalübertragung und mikroumgebungsgetriebenen Zellverhaltensweisen.

Das SPA-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SIPA1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SIPA1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SIPA1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPA-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SIPA1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPA-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SIPA1-Exone abzielen, die für die SPA-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SIPA1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPA-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPA-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SIPA1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPA-1 HDR-Plasmid (h) und SPA-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SIPA1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SIPA1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.