Plásmido CRISPR de Activación (h) Sp4: sc-402568-ACT

El SP4 humano codifica el factor de transcripción Sp4, un miembro de la familia Sp/KLF que se une a elementos promotores ricos en GC para regular programas de expresión génica que controlan la diferenciación neuronal, la plasticidad sináptica y la transcripción dependiente de la actividad. Sp4 contribuye a procesos de control de la cromatina y de la transcripción que modelan las trayectorias del neurodesarrollo y la excitabilidad neuronal, lo que lo vincula con vías que gobiernan la maduración de axones y dendritas y la formación de circuitos. La alteración de la expresión o la función de SP4/Sp4 se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia para estudiar la desregulación de redes transcripcionales en el sistema nervioso. En modelos celulares, la modulación de SP4 puede utilizarse para investigar genes diana aguas abajo y circuitos de regulación génica que influyen en estados neuronales y gliales.

Sp4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sp4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sp4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sp4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sp4 en células tumorales con expresión de SP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.