Plasmide CRISPR/Cas9 KO SP140 (m): sc-436685

Présentation

SP140 code une protéine nucléaire à localisation « speckled » qui agit comme lecteur épigénétique et régulateur transcriptionnel dans les cellules immunitaires, avec des fonctions liées à l’organisation de la chromatine et au contrôle des programmes géniques inflammatoires. Chez la souris, SP140 est enrichie dans les lignées hématopoïétiques et a été associée à la modulation de la signalisation immunitaire innée et adaptative, y compris des voies influençant les réponses cytokiniques et des réseaux transcriptionnels déclenchés par l’antigène. Grâce à ses domaines de liaison à la chromatine, SP140 peut façonner des états d’expression génique pertinents pour la différenciation et l’activation des macrophages et des lymphocytes. Une activité de SP140 dérégulée a été reliée à des pathologies à médiation immunitaire et à des phénotypes de réponse de l’hôte, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les mécanismes inflammatoires et le contrôle transcriptionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SP140 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sp140 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sp140, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sp140 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SP140.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sp140 pour l'étude de la signalisation de SP140, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sp140 essentiels à la fonction de SP140
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sp140 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SP140 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SP140 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sp140. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SP140 plasmide HDR (m) et le SP140 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sp140 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sp140 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.