Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sp1: sc-400166-ACT

Le gène humain **SP1** code le facteur de transcription Sp1, une protéine se liant aux GC-box qui coordonne la transcription basale et inductible au niveau des promoteurs et des enhancers à travers divers réseaux géniques. Sp1 intègre des signaux issus des voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et TGF-β afin de réguler la progression du cycle cellulaire, l’apoptose, la différenciation, la réparation de l’ADN, ainsi que les réponses au stress oxydatif et métabolique. En contrôlant des gènes impliqués dans l’angiogenèse, le remodelage de la matrice extracellulaire et la signalisation inflammatoire, l’activité de SP1 influence la plasticité cellulaire et l’homéostasie tissulaire. Des programmes transcriptionnels dépendants de Sp1 dérégulés ont été associés à la transformation oncogénique, à la fibrose, ainsi qu’à la physiopathologie de maladies neurodégénératives et métaboliques, faisant de SP1 un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

Sp1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sp1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sp1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sp1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sp1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.