Plásmido Doble Nickase (h) SP-lyase: sc-402278-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SP-lyase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SP-lyase (h) y el plásmido de doble nickasa SP-lyase (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SGPL1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SP-lyase | sc-402278-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SP-lyase | sc-402278-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SGPL1 codifica la liasa humana de esfingosina-1-fosfato (SP-liasa), una enzima asociada al retículo endoplásmico que cataliza la escisión irreversible de la esfingosina-1-fosfato (S1P) en hexadecenal y fosfoetanolamina. Al finalizar la señalización mediada por S1P y vincular el catabolismo de los esfingolípidos con la biosíntesis de fosfolípidos, la SP-liasa regula la homeostasis lipídica, la composición de las membranas y los gradientes de lípidos bioactivos que influyen en la migración celular, la supervivencia y las respuestas inflamatorias. La actividad de SGPL1 se interseca con el metabolismo de esfingolípidos, la dinámica del reóstato ceramida/S1P y las vías de señalización posteriores mediadas por GPCR, que modulan las respuestas celulares al estrés y la función de barrera. La alteración genética de SGPL1 se asocia con trastornos multisistémicos con perfiles de esfingolípidos alterados, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por lípidos.
SP-lyase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SGPL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SGPL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SGPL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SGPL1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.