Plasmide CRISPR/Cas9 KO SP-B (m): sc-422901

Présentation

Sftpb code la protéine du surfactant B (SP-B), une protéine hydrophobe sécrétée indispensable à l’assemblage et à la fonction du surfactant pulmonaire dans les cellules épithéliales alvéolaires de type II. SP-B favorise l’adsorption des phospholipides et la stabilité du film à l’interface air–liquide, soutenant la compliance alvéolaire et l’efficacité des échanges gazeux. Sa maturation et son trafic sont étroitement liés à la biogenèse des corps lamellaires et aux voies sécrétoires régulées, et toute perturbation de SP-B altère l’homéostasie du surfactant ainsi que les réponses au stress cellulaire dans le poumon distal. Des modifications de l’expression ou de la fonction de Sftpb sont largement utilisées comme levier moléculaire pour étudier, dans des modèles murins, les mécanismes de dysfonction du surfactant et les phénotypes de lésions pulmonaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SP-B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sftpb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sftpb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sftpb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SP-B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sftpb pour l'étude de la signalisation de SP-B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sftpb essentiels à la fonction de SP-B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sftpb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SP-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SP-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sftpb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SP-B plasmide HDR (m) et le SP-B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sftpb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sftpb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.