Plásmido CRISPR de Activación (h) SP-A1: sc-400974-ACT

SFTPA1 codifica la proteína del surfactante A1 (SP-A1), una colectina secretada por las células epiteliales alveolares de tipo II que contribuye a la homeostasis del surfactante pulmonar y a la vigilancia inmunitaria innata en la interfaz aire–líquido. SP-A1 se une a carbohidratos microbianos y a ligandos endógenos para modular la opsonización, la aglutinación y la actividad de los fagocitos, configurando la señalización inflamatoria en el pulmón distal. Mediante interacciones con vías de reconocimiento de patrones y con la organización lipídica del surfactante, SP-A1 ayuda a regular la estabilidad alveolar y la defensa del huésped frente al estrés ambiental e infeccioso. La expresión o función alteradas de SP-A1 se han relacionado con una mayor susceptibilidad a fenotipos pulmonares inflamatorios y fibróticos, y ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar la biología de las enfermedades de las vías aéreas y los alvéolos.

SP-A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SFTPA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SP-A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SFTPA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SFTPA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SP-A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SFTPA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SP-A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SP-A1 en células tumorales con expresión de SFTPA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.