Sox9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400143-NIC

SOX9は転写因子Sox9をコードしており、Sox9は高移動度群（HMG）に属するDNA結合タンパク質として、複数の組織にわたって系譜（ラインエージ）決定や分化プログラムを制御する。発生過程および成体の恒常性維持において、Sox9はTGF-β/BMP、WNT/β-カテニン、Hedgehog、Notchなどのシグナル入力を統合し、軟骨形成、幹／前駆細胞の維持、上皮細胞の運命決定に関与する遺伝子ネットワークを制御する。SOX9の活性は、標的座位に対する直接的な転写制御やパートナーとなる転写因子との協調を通じて、細胞外マトリックス産生および細胞周期動態にも影響を及ぼす。SOX9の発現や機能の破綻は先天性骨格疾患と関連し、異常分化や腫瘍性の転写プログラムを伴う病的状態にも寄与することから、発生・疾患生物学の機構解明研究で広く用いられる重要な標的となっている。

Sox9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SOX9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SOX9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SOX9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SOX9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。