Sox9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400143-ACT

SOX9は、転写因子Sox9をコードしている。Sox9は高移動度群（HMG）型のDNA結合タンパク質であり、軟骨形成や複数の上皮組織の発生を含む、系譜決定および分化プログラムを制御する。Sox9は、TGF-β/BMP、WNT/βカテニン、Hedgehog、Notchなどの経路からのシグナルを統合し、細胞運命決定の過程でエンハンサー活性とクロマチンアクセシビリティを制御する。ヒト生物学において、SOX9発現の異常は発生異常と関連し、がん関連の転写ネットワークにも高頻度に関与することが知られている。Sox9活性の変化は、増殖、幹細胞様状態、上皮—間葉系の可塑性に影響し得る。文脈依存的な調節因子として、SOX9は臓器発生モデル、幹細胞分化、ならびに疾患関連の細胞状態における転写制御機構の研究で広く解析されている。

Sox9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SOX9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sox9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SOX9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSOX9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sox9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSOX9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSox9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSOX9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSox9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。