Sox2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423086-ACT

Sox2 kodiert einen Transkriptionsfaktor mit HMG-Box (High-Mobility-Group), der als zentraler Regulator von Pluripotenz und Linienfestlegung im Maus-Embryo sowie in adulten Stammzellkompartimenten fungiert. SOX2 wirkt mit OCT4 und NANOG zusammen, um die Chromatin-Zugänglichkeit und Transkriptionsprogramme zu steuern, die die Selbsterneuerung aufrechterhalten und gleichzeitig eine vorzeitige Differenzierung begrenzen; besonders wichtig ist SOX2 für die Aufrechterhaltung neuraler Vorläuferzellen und die Entwicklung von Sinnesorganen. Es ist Teil entwicklungsbiologischer Genregulationsnetzwerke, die mit Wnt/β-Catenin-, FGF/ERK-, BMP- und Notch-Signalwegen verzahnt sind, um Zellschicksalsentscheidungen zu koordinieren. Eine fehlregulierte SOX2-Expression wird mit Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht und ist häufig an onkogener „Stemness“ beteiligt, was SOX2 für die Modellierung von Differenzierungsdefekten und tumorähnlichen transkriptionellen Zuständen in vitro relevant macht.

Sox2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Sox2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sox2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Sox2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Sox2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sox2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Sox2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sox2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sox2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Sox2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.