Plásmido CRISPR de Activación (h) SOSTDC1: sc-403398-ACT

El gen humano SOSTDC1 codifica la proteína 1 con dominio de esclerostina, un antagonista secretado de las vías de señalización BMP y Wnt que modula las interacciones receptor–ligando para limitar la actividad de dichas vías. Al atenuar la señalización SMAD impulsada por BMP e influir en la transcripción dependiente de β-catenina, SOSTDC1 contribuye a la regulación del patrón de desarrollo, la diferenciación osteogénica y la homeostasis tisular. Se ha informado de una expresión alterada de SOSTDC1 en múltiples contextos de señalización desregulada de factores de crecimiento, incluidos cánceres y estados fibróticos o asociados a remodelación, donde el equilibrio BMP/Wnt afecta a la proliferación, la diferenciación y los programas de matriz extracelular. Como regulador soluble de la vía, se estudia con frecuencia en señalización paracrina, el diálogo epitelio–mesénquima y fenotipos dependientes del microambiente.

SOSTDC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SOSTDC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SOSTDC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SOSTDC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SOSTDC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SOSTDC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SOSTDC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SOSTDC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SOSTDC1 en células tumorales con expresión de SOSTDC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.