Plasmide CRISPR d'Activation (h) SOAT2: sc-409713-ACT

La SOAT2 humaine (sterol O-acyltransferase 2), également appelée ACAT2, est une enzyme localisée dans le réticulum endoplasmique qui catalyse l’estérification du cholestérol avec des acyl-CoA d’acides gras à longue chaîne pour former des esters de cholestéryle. Cette réaction soutient le stockage intracellulaire du cholestérol, la biogenèse des gouttelettes lipidiques et l’assemblage des lipoprotéines, reliant l’activité de SOAT2 à l’homéostasie des stérols et à des réseaux plus larges du métabolisme lipidique. SOAT2 agit à l’interface du trafic du cholestérol, de l’absorption intestinale et de la gestion hépatique des lipides, en influençant des voies qui régissent la composition membranaire et la mise en tampon des lipides neutres. Une dérégulation du métabolisme des esters de cholestéryle et des altérations de l’expression de SOAT2 ont été associées à des phénotypes pertinents pour les maladies métaboliques et cardiovasculaires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du stress cellulaire et du remodelage induits par les lipides.

SOAT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOAT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SOAT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOAT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOAT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SOAT2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOAT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SOAT2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SOAT2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOAT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.