Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX5 (m): sc-427326

Présentation

Snx5 code la sorting nexin 5 (SNX5), un adaptateur contenant un domaine PX qui se lie aux membranes endosomales enrichies en phosphoinositides et participe au tri endosomal ainsi qu’à la tubulation des membranes. SNX5 intervient dans les voies de trafic et de recyclage des récepteurs, notamment dans des processus coordonnés avec des complexes associés au rétromère et aux SNX-BAR, qui façonnent les transporteurs endosomaux et régulent la récupération des cargos à partir des endosomes précoces. En contrôlant le renouvellement des récepteurs et la durée de la signalisation, SNX5 influence le transport vésiculaire, la polarisation cellulaire et l’homéostasie membranaire. Des réseaux de trafic endocytaire dérégulés impliquant les sorting nexins ont été associés à la neurodégénérescence, au remodelage de la signalisation lié au cancer et à des dysfonctionnements immunitaires, ce qui fait de Snx5 un nœud utile pour des recherches centrées sur les voies dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Snx5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Snx5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Snx5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SNX5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Snx5 pour l'étude de la signalisation de SNX5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Snx5 essentiels à la fonction de SNX5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Snx5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SNX5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SNX5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Snx5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SNX5 plasmide HDR (m) et le SNX5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Snx5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Snx5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.