SNX3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404028-ACT

SNX3 (Sorting Nexin 3) ist ein endosomaler Trafficking-Faktor mit PX-Domäne, der an Phosphatidylinositol-3-phosphat bindet und zur Organisation der Membrandynamik früher Endosomen beiträgt. Er wirkt zusammen mit dem Retromer-Komplex, um das Recycling vom Endosom zum trans-Golgi-Netzwerk zu fördern und die Sortierung von Rezeptoren und Transportern an der Plasmamembran zu regulieren, wodurch Signalstärke und Membranhomöostase beeinflusst werden. Über seine Funktionen bei der Cargorückgewinnung und dem endozytotischen Recycling beeinflusst SNX3 Signalwege, die mit der WNT-Sekretion und dem Rezeptor-Trafficking verknüpft sind, sowie allgemeinere, lysosomen- und autophagienahen Prozesse. Fehlregulierte endosomale Sortierung und retromerassoziierter Transport werden mit Neurodegeneration, Krebsbiologie und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch SNX3 einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu trafficking-abhängiger Signalgebung darstellt.

SNX3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNX3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SNX3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNX3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNX3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SNX3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNX3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SNX3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SNX3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNX3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.