Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNAP47 (h): sc-410264

Présentation

SNAP47 code une protéine de la famille des récepteurs SNAP (SNARE) qui participe à l’arrimage des vésicules et à la fusion membranaire en se liant à des syntaxines et des VAMPs apparentés afin de réguler l’exocytose et le trafic endomembranaire. Elle a été impliquée dans des voies sécrétoires spécialisées, notamment la libération de neurotransmetteurs et la délivrance régulée de cargaisons, reliant l’activité de SNAP47 au cycle des vésicules synaptiques, au recyclage membranaire et au contrôle spatial de la localisation des protéines. Par son rôle dans la dynamique des complexes SNARE, SNAP47 influence des processus cellulaires tels que la croissance des neurites, le trafic des récepteurs et la sécrétion couplée à un stimulus. Les perturbations du trafic vésiculaire et de la signalisation synaptique sont pertinentes dans des contextes de recherche en neurodéveloppement et en neurodégénérescence, ce qui fait de SNAP47 une cible utile pour explorer des phénotypes dépendants du transport.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SNAP47 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SNAP47 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SNAP47, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SNAP47 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SNAP47.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SNAP47 pour l'étude de la signalisation de SNAP47, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SNAP47 essentiels à la fonction de SNAP47
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SNAP47 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SNAP47 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SNAP47 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SNAP47. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SNAP47 plasmide HDR (h) et le SNAP47 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SNAP47 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SNAP47 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.