Plasmide CRISPR/Cas9 KO smoothelin (h): sc-400923

Présentation

SMTN code la smootheline, une protéine cytosquelettique spécifiquement enrichie dans les cellules musculaires lisses pleinement différenciées, où elle participe à l’organisation des filaments d’actine et au maintien de l’intégrité de l’appareil contractile. La smootheline contribue à la régulation de la contractilité du muscle lisse, de l’architecture cellulaire et de la stabilité phénotypique lors du remodelage du muscle lisse vasculaire et viscéral. Des profils d’expression altérés de SMTN sont utilisés comme marqueurs de l’état de différenciation du muscle lisse et sont impliqués dans des processus tels que le remodelage vasculaire, les transitions en myofibroblastes associées à la fibrose et les modifications du tonus vasculaire. En tant que composant cytosquelettique à expression restreinte à une lignée, SMTN est pertinent pour l’étude des mécanismes qui gouvernent la maturation du muscle lisse, la mécanotransduction et les réseaux de signalisation du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO smoothelin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SMTN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SMTN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SMTN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine smoothelin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SMTN pour l'étude de la signalisation de smoothelin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SMTN essentiels à la fonction de smoothelin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SMTN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le smoothelin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le smoothelin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SMTN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le smoothelin plasmide HDR (h) et le smoothelin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SMTN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SMTN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.