SMEK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412572

Descripción general

PPP4R3A codifica SMEK1, una subunidad reguladora de la fosfatasa de proteínas 4 (PP4) que dirige la actividad fosfatasa hacia sustratos específicos para modular la señalización dependiente de la fosforilación. Se ha implicado a SMEK1 en el control de la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y procesos asociados a la cromatina mediante eventos de desfosforilación mediados por PP4 que configuran la señalización de los puntos de control y la dinámica de proteínas nucleares. Al influir en el equilibrio entre quinasas y fosfatasas, SMEK1 puede afectar vías relacionadas con la estabilidad del genoma, la proliferación y la señalización de estrés. La desregulación de las redes reguladoras de PP4, incluidas las funciones asociadas a PPP4R3A, es relevante para estudios de señalización oncogénica, estrés de replicación y otros trastornos en los que la fosforilación aberrante y la reparación deficiente del ADN contribuyen a la patología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SMEK1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PPP4R3A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PPP4R3A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PPP4R3A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SMEK1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PPP4R3A para la investigación de la señalización de SMEK1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PPP4R3A críticos para la función de SMEK1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PPP4R3A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SMEK1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SMEK1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PPP4R3A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SMEK1 (h) y el plásmido HDR SMEK1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PPP4R3A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PPP4R3A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.