Plásmido Doble Nickase (h) Smad6: sc-401411-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Smad6 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Smad6 (h) y el plásmido de doble nickasa Smad6 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SMAD6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Smad6 Anticuerpo (D-4): sc-25321
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Smad6 | sc-401411-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Smad6 | sc-401411-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD6 codifica Smad6, un SMAD inhibidor que antagoniza la señalización de la superfamilia BMP y TGF-β al interferir con la fosforilación de los SMAD regulados por receptor y con la posterior formación de complejos transcripcionales. Al atenuar los programas dependientes de BMP, Smad6 contribuye al control de la diferenciación osteogénica, la morfogénesis vascular y cardíaca, y la regulación dependiente del contexto de las respuestas inflamatorias y de la matriz extracelular. La actividad alterada de SMAD6 se ha asociado en la literatura con fenotipos cardiovasculares y craneofaciales congénitos, así como con procesos de remodelado tisular desregulados en los que el equilibrio BMP/TGF-β es crítico. Como regulador de retroalimentación negativa, SMAD6 se estudia con frecuencia para definir umbrales de la vía, la duración de la señal y la intercomunicación con MAPK y con el recambio mediado por ubiquitina de los componentes de señalización.
Smad6 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMAD6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMAD6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMAD6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMAD6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.