Plasmide CRISPR/Cas9 KO Smad6 (m): sc-421529

Présentation

SMAD6 est un SMAD inhibiteur qui atténue la signalisation en aval des récepteurs BMP et, dans certains contextes, des récepteurs du TGF-β, en perturbant la phosphorylation des SMAD régulés par le récepteur ainsi que la formation de complexes. Dans les cellules de souris, Smad6 aide à ajuster les programmes transcriptionnels induits par les BMP qui gouvernent la mise en place des patrons développementaux, la différenciation ostéogénique et chondrogénique, ainsi que l’homéostasie vasculaire. En modulant la signalisation canonique des SMAD, SMAD6 contribue au contrôle du remodelage de la matrice extracellulaire, des décisions de destinée cellulaire et de la régulation par rétrocontrôle des voies des morphogènes. Une activité de Smad6 dérégulée a été associée à une sortie anormale de la voie BMP et à des phénotypes pertinents pour la biologie cardiovasculaire et squelettique congénitale, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la limitation de la voie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Smad6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Smad6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Smad6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Smad6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Smad6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Smad6 pour l'étude de la signalisation de Smad6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Smad6 essentiels à la fonction de Smad6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Smad6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Smad6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Smad6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Smad6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Smad6 plasmide HDR (m) et le Smad6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Smad6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Smad6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.