Plasmide CRISPR d'Activation (h) Smad6: sc-401411-ACT

Le gène humain **SMAD6** code **Smad6**, un SMAD inhibiteur qui atténue la signalisation en aval de la superfamille **TGF-β**, en particulier la branche **BMP**. Smad6 agit comme régulateur de rétrocontrôle négatif en interférant avec la phosphorylation des SMAD régulés par les récepteurs et en modulant la formation des complexes SMAD ainsi que la sortie transcriptionnelle. Par ces mécanismes, il influence la mise en place des patrons du développement, la différenciation ostéogénique, l’homéostasie endothéliale et vasculaire, ainsi que les interactions avec la signalisation inflammatoire. Une activité ou une expression altérée de **SMAD6** a été associée à des phénotypes cardiovasculaires et cranio-faciaux congénitaux, et a été étudiée dans des contextes où un déséquilibre des voies BMP/TGF-β contribue à des processus de remodelage et de calcification pertinents pour la maladie.

Smad6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMAD6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Smad6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMAD6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMAD6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Smad6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMAD6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Smad6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Smad6 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMAD6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.