Plásmido Doble Nickase (h) Smad4: sc-400110-NIC

SMAD4 codifica Smad4, un co-mediador central de la señalización canónica de TGF-β y BMP que forma complejos heteroméricos con SMAD reguladas por el receptor para controlar programas transcripcionales que gobiernan la proliferación, la diferenciación y la dinámica epitelio–mesénquima. Tras la activación del receptor inducida por el ligando, los complejos que contienen Smad4 se acumulan en el núcleo e integran señales de vías como MAPK, WNT/β-catenina y PI3K/AKT para modular una expresión génica dependiente del contexto. La alteración de SMAD4 modifica el control del crecimiento dependiente de TGF-β y la homeostasis tisular, y con frecuencia se asocia con disfunción de supresores tumorales en neoplasias gastrointestinales y pancreáticas. Como nodo de señalización, SMAD4 se estudia ampliamente por sus funciones en el desarrollo, en estados transcripcionales relacionados con la fibrosis y en la regulación de genes con efectos inmunomoduladores.

Smad4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMAD4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMAD4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMAD4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMAD4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.