Plasmide CRISPR d'Activation (h) Smad3: sc-400069-ACT

SMAD3 code pour Smad3, un SMAD régulé par le récepteur qui transmet les signaux canoniques de la superfamille TGF-β, des récepteurs de type I activés jusqu’au noyau. Après phosphorylation, Smad3 forme des complexes avec SMAD4 et coopère avec des facteurs de transcription spécifiques de lignée afin de contrôler des gènes impliqués dans le remodelage de la matrice extracellulaire, la transition épithélio-mésenchymateuse, la régulation immunitaire et le contrôle du cycle cellulaire. Par ce programme transcriptionnel, Smad3 influence des processus tels que la fibrose, l’inflammation et la différenciation dans de nombreux contextes tissulaires. Une signalisation SMAD3 dérégulée a été associée à des phénotypes héréditaires du tissu conjonctif et vasculaires, ainsi qu’à des programmes aberrants induits par le TGF-β dans des modèles de cancer et de maladies inflammatoires chroniques.

Smad3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMAD3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Smad3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMAD3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMAD3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Smad3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMAD3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Smad3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Smad3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMAD3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.