Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLITRK4 (h): sc-414460

Présentation

SLITRK4 code une protéine neuronale transmembranaire de la famille SLITRK, impliquée dans la croissance des neurites, le développement des synapses et les processus d’adhérence cellule–cellule qui façonnent la formation des circuits neuronaux. Grâce à ses motifs extracellulaires à répétitions riches en leucine (LRR) et à ses interfaces de signalisation intracellulaires, SLITRK4 est associée à des voies contrôlant la synaptogenèse, l’organisation des axones et des dendrites, ainsi que la régulation de la connectivité neuronale. Les profils d’expression dans le système nerveux et l’homologie fonctionnelle au sein des protéines SLITRK étayent un rôle dans la biologie du neurodéveloppement et des mécanismes pertinents pour les troubles neuropsychiatriques. Des altérations de l’activité de la famille SLITRK ont été étudiées dans le contexte de dysfonctionnements des circuits, ce qui fait de SLITRK4 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLITRK4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLITRK4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLITRK4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLITRK4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLITRK4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLITRK4 pour l'étude de la signalisation de SLITRK4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLITRK4 essentiels à la fonction de SLITRK4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLITRK4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLITRK4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLITRK4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLITRK4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLITRK4 plasmide HDR (h) et le SLITRK4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLITRK4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLITRK4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.