Slfn14 Double Nickase Plasmid (h): sc-415573-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Slfn14 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Slfn14 Double-Nickase-Plasmid (h) und Slfn14 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLFN14 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Slfn14 Double Nickase Plasmid (h) | sc-415573-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Slfn14 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-415573-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLFN14 (Schlafen-Familienmitglied 14) kodiert Slfn14, ein mutmaßlich RNA-assoziiertes Protein, das an der Regulation der Translation und des RNA-Stoffwechsels während zellulärem Stress und der Differenzierung beteiligt ist. Als Teil der Schlafen-Genfamilie wurde Slfn14 mit der Modulation immunbezogener Programme und der Kontrolle der Proteinsynthese in Verbindung gebracht; dabei überschneiden sich seine Effekte mit Signalwegen, die die Ribosomenfunktion und die posttranskriptionelle Regulation steuern. Beim Menschen sind Varianten in SLFN14 mit hereditärer Thrombozytopenie und Defekten der Thrombozytenfunktion assoziiert, was eine Rolle bei der Reifung von Megakaryozyten und in der Thrombozytenbiologie stützt. Diese Eigenschaften machen SLFN14 zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen der Hämatopoese, der RNA-Verarbeitung und der Kontrolle der Genexpression in relevanten Zellmodellen zu untersuchen.
Slfn14 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLFN14-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLFN14 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLFN14-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLFN14-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.