Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC48A1 (h): sc-405746

Présentation

SLC48A1 code un transporteur lysosomal de l’hème (également appelé HRG1) qui assure la translocation de l’hème de la lumière phagolysosomale vers le cytosol au cours de l’érythrophagocytose et du catabolisme de l’hème. En contrôlant la disponibilité intracellulaire de l’hème, SLC48A1 influence le recyclage hème–fer, l’homéostasie redox et les voies de signalisation dépendantes de l’hème dans les macrophages et d’autres cellules phagocytaires. Une perturbation du trafic de l’hème peut modifier les réponses au stress oxydant et la gestion du fer, reliant ainsi la fonction de SLC48A1 à des programmes cellulaires impliqués dans l’inflammation et l’homéostasie tissulaire. SLC48A1 est donc pertinent pour la recherche sur le métabolisme de l’hème, la biologie des lysosomes et les mécanismes à l’origine de dérégulations liées au fer dans des contextes de maladies humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC48A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC48A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC48A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC48A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC48A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC48A1 pour l'étude de la signalisation de SLC48A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC48A1 essentiels à la fonction de SLC48A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC48A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC48A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLC48A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC48A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC48A1 plasmide HDR (h) et le SLC48A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC48A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC48A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.