Plasmide Double Nickase (h) SLC35C2: sc-409264-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SLC35C2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SLC35C2 Double Nickase (h) et le plasmide SLC35C2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SLC35C2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) SLC35C2 | sc-409264-NIC | 20 µg | $410.00 |
SLC35C2 code un transporteur de sucres nucléotidiques résidant dans l’appareil de Golgi, impliqué dans l’apport de donneurs de monosaccharides activés nécessaires à la glycosylation des protéines et des lipides. En régulant le flux de sucres nucléotidiques vers la voie sécrétoire, SLC35C2 peut influencer la maturation des glycannes, la composition des glycoprotéines de surface cellulaire et des processus dépendants du trafic, tels que l’adhésion et la signalisation des récepteurs. La perturbation des réseaux de glycosylation golgiens est largement associée à une reconnaissance immunitaire modifiée, à des phénotypes développementaux et à des réponses au stress, faisant de SLC35C2 une cible utile pour disséquer la biologie cellulaire dépendante de la glycosylation. L’expression et les variations fonctionnelles des transporteurs de la famille SLC35 sont souvent étudiées dans le contexte des troubles congénitaux de la glycosylation et du remodelage du glycome associé au cancer, ce qui soutient des études mécanistiques sur la sensibilité des voies et leurs redondances.
SLC35C2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC35C2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC35C2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC35C2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC35C2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.