Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLC12A9: sc-408925-ACT

SLC12A9 code un membre de la famille 12 des transporteurs de solutés (SLC12), un groupe de protéines liées au transport de cations et de chlorure. Il serait impliqué dans la régulation de l’homéostasie ionique à travers les membranes intracellulaires et dans le contrôle de l’équilibre osmotique, du pH et des réponses de volume cellulaire. En modulant la gestion du chlorure et des cations alcalins, SLC12A9 pourrait influencer le potentiel de membrane ainsi que des voies de signalisation associées à l’adaptation au stress et à la fonction des organites. Des modifications d’expression ou une dérégulation des processus de transport ionique sont fréquemment associées à la physiologie épithéliale et neuronale, avec une pertinence plus large pour des troubles où l’équilibre électrolytique et le contrôle du volume cellulaire sont perturbés. Ainsi, SLC12A9 suscite un intérêt pour des études mécanistiques reliant les réseaux de transport ionique à la régulation des états cellulaires dans des systèmes humains.

SLC12A9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC12A9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLC12A9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC12A9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC12A9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLC12A9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC12A9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLC12A9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLC12A9 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC12A9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.