Plásmido CRISPR de Activación (m) SLAIN2: sc-429242-ACT

Slain2 codifica SLAIN2, un adaptador de seguimiento del extremo plus de los microtúbulos que coopera con las proteínas EB y el complejo ch-TOG/XMAP215 para favorecer un crecimiento persistente de los microtúbulos y coordinar la organización del citoesqueleto. Al regular la dinámica de los microtúbulos, SLAIN2 influye en el transporte intracelular, la polaridad celular y la función del huso mitótico, procesos centrales para la morfogénesis neuronal y el control de la proliferación. La alteración de las redes reguladoras de microtúbulos puede interrumpir el crecimiento axonal y la conectividad sináptica, y también afectar la estabilidad cromosómica mediante cambios en el ensamblaje del huso. Para la investigación biomédica en ratón, Slain2 ofrece un punto de entrada accesible para estudiar cómo la regulación del extremo plus de los microtúbulos se integra con la progresión del ciclo celular y los programas de diferenciación.

SLAIN2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Slain2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLAIN2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Slain2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Slain2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLAIN2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Slain2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLAIN2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLAIN2 en células tumorales con expresión de Slain2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.