SKT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431571

Descripción general

El gen Etl4 de ratón codifica la proteína SKT, un factor poco caracterizado que se predice que contribuye a programas reguladores intrínsecos de la célula que controlan la expresión génica y la homeostasis celular. Las anotaciones disponibles sugieren su participación en procesos fundamentales como la proliferación, la diferenciación y las respuestas adaptativas al estrés, en consonancia con funciones en vías de desarrollo y de mantenimiento tisular. Dado que este tipo de reguladores puede influir en la arquitectura de las vías de señalización y en la estabilidad fenotípica, la perturbación de SKT resulta útil para investigar los mecanismos que subyacen a estados celulares relevantes para enfermedades, incluidos el crecimiento desregulado y los programas de linaje alterados. Los modelos de pérdida de función de Etl4/SKT permiten cartografiar las consecuencias transcripcionales y de señalización aguas abajo en células de ratón y en contextos in vivo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SKT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Etl4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Etl4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Etl4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SKT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Etl4 para la investigación de la señalización de SKT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Etl4 críticos para la función de SKT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Etl4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SKT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SKT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Etl4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SKT (m) y el plásmido HDR SKT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Etl4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Etl4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.