Partículas Lentivirales de Activación (h) Six2: sc-402975-LAC

SIX2 codifica Six2, un factor de transcripción homeobox que regula el mantenimiento de células progenitoras y la especificación de linajes durante el desarrollo humano del riñón y de las estructuras craneofaciales. Six2 actúa en redes transcripcionales que controlan la autorrenovación y la diferenciación de los progenitores de nefrona, integrándose con vías como la señalización WNT/β-catenina, FGF y BMP para equilibrar programas de crecimiento y maduración. La expresión desregulada de SIX2 se ha asociado con trastornos del desarrollo que afectan la morfogénesis renal y el patrón craneofacial, y la actividad alterada de SIX2 también se estudia en contextos de plasticidad epitelio-mesenquimal y biología tumoral. Como regulador nuclear de unión al ADN, Six2 constituye un nodo accesible para analizar circuitos de regulación génica que gobiernan el estado de diferenciación y la identidad tisular.

Las partículas de activación lentiviral Six2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SIX2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Six2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SIX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Six2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SIX2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.