Plásmido CRISPR de Activación (h) Six2: sc-402975-ACT

SIX2 codifica el factor de transcripción homeobox Six2, un regulador del desarrollo que mantiene la identidad de las células progenitoras y controla programas de especificación de linaje. En tejidos humanos, las redes transcripcionales impulsadas por Six2 influyen en la diferenciación mesenquimal, en las interacciones epitelio–mesénquima y en vías asociadas a la organogénesis, con efectos posteriores sobre la temporización del ciclo celular y el mantenimiento del estado de la cromatina. La expresión desregulada de SIX2 se ha vinculado a programas génicos del desarrollo alterados y se ha descrito en contextos de proliferación y diferenciación aberrantes, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de trastornos del desarrollo y de reprogramación transcripcional oncogénica. Como regulador de unión al ADN, Six2 se utiliza con frecuencia como un nodo para investigar circuitos de control transcripcional y decisiones de destino celular en modelos de células madre y progenitoras.

Six2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SIX2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Six2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SIX2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SIX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Six2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SIX2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Six2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Six2 en células tumorales con expresión de SIX2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.