SIRT3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400675-ACT

O SIRT3 humano codifica uma desacetilase mitocondrial dependente de NAD+ que regula a acetilação de proteínas para coordenar o metabolismo oxidativo, a biogênese mitocondrial e a homeostase redox. Ao desacetilar alvos envolvidos na oxidação de ácidos graxos, no ciclo do TCA e na função da cadeia de transporte de elétrons, o SIRT3 influencia a produção de ATP, a detoxificação de ROS e vias de controle de qualidade mitocondrial, como a mitofagia. A atividade do SIRT3 conecta a detecção de nutrientes e as respostas ao estresse a programas de sobrevivência celular, com efeitos a jusante na sinalização AMPK/PGC-1α e nas defesas antioxidantes, incluindo o tamponamento de ROS dependente de SOD2. A expressão ou atividade desregulada de SIRT3 tem sido associada a fenótipos de disfunção mitocondrial relevantes para a biologia de doenças metabólicas, pesquisas em neurodegeneração e estudos de metabolismo do câncer.

SIRT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIRT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SIRT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIRT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIRT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SIRT3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIRT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SIRT3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SIRT3 em células tumorais com expressão de SIRT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.