SIRT2 Double Nickase Plasmid (m): sc-425703-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SIRT2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SIRT2 Double-Nickase-Plasmid (m) und SIRT2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sirt2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SIRT2: sc-28298
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SIRT2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425703-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Sirt2-Gen kodiert die NAD⁺-abhängige Deacetylase SIRT2, ein überwiegend zytosolisches Sirtuin, das jedoch auch in den Zellkern shuttelt und die Acetylierung wichtiger Substrate, darunter α‑Tubulin und Histone, reguliert. Durch die Kontrolle der Mikrotubulusdynamik, des Zellzyklusfortschritts, der Chromatinorganisation und stressresponsiver metabolischer Signalwege beeinflusst SIRT2 Prozesse wie die mitotische Genauigkeit, inflammatorische Signalübertragung und neuronale Homöostase. Die SIRT2-Aktivität greift in Signalwege ein, die mit Energiesensorik und Proteostase verknüpft sind, einschließlich Crosstalk mit FOXO- und NF‑κB‑assoziierten Programmen sowie der Regulation von Proteinacetylierungszuständen, die Autophagie und Antworten auf oxidativen Stress beeinflussen. Eine veränderte SIRT2-Expression oder -Funktion wurde im Kontext von Neurodegeneration, metabolischer Dysfunktion und krebsbezogenen Phänotypen untersucht, was SIRT2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien in Mausmodellen und Primärzellen macht.
SIRT2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sirt2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sirt2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sirt2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sirt2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.