Plasmide Double Nickase (m) SIRP-α: sc-422514-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SIRP-α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SIRP-α Double Nickase (m) et le plasmide SIRP-α Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sirpa. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SIRP-α Antibody (C-7): sc-376884
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SIRP-α | sc-422514-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) SIRP-α | sc-422514-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La souris Sirpa code la protéine régulatrice du signal alpha (SIRP-α), un récepteur de la superfamille des immunoglobulines exprimé principalement par les cellules myéloïdes, où il agit comme un point de contrôle inhibiteur de la phagocytose. En se liant à CD47, SIRP-α transmet un signal via des motifs ITIM qui recrutent les phosphatases SHP-1/2, atténuant les réarrangements du cytosquelette, la signalisation des intégrines et les voies d’activation de l’immunité innée qui régulent l’ingestion et le tonus inflammatoire. Cet axe influence l’homéostasie des macrophages et des cellules dendritiques, la gestion des antigènes et l’élimination des cellules apoptotiques, et il est largement étudié dans des contextes tels que l’échappement immunitaire tumoral, la biologie de la transplantation et les phénotypes auto-immuns ou inflammatoires. Des différences dépendantes de la souche et de l’allèle de SIRP-α chez la souris peuvent également moduler la compatibilité des xénogreffes et les réponses immunitaires innées, faisant de Sirpa une cible fréquemment étudiée en immunologie et dans le développement de modèles de maladies.
SIRP-α Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sirpa dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sirpa. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sirpa. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sirpa.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.